발명특허 : 코로나바이러스 정보 4

피어 브라이트 연구소 의 코로나 바이러스 미국특허청 승인 정보 

코로나 바이러스

요약

본 발명은 하나 이상의 비 구조 단백질 (들) (nsp) -10, nsp-14, nsp-15 또는 nsp-16에서 돌연변이를 포함하는 다 단백질을 코딩하는 변이체 복제 유전자를 포함하는 약독 화 된 생 코로나 바이러스를 제공한다. 

코로나 바이러스는 개체에서 감염성 기관지염과 같은 질병을 치료 및 / 또는 예방하기위한 백신으로 사용될 수있다.

 

 

기술

발명의 분야

 

본 발명은 바이러스가 감소 된 병원성을 갖도록하는 변이체 복제 유전자를 포함하는 약독 화 된 코로나 바이러스에 관한 것이다. 본 발명은 또한 질병을 예방 및 / 또는 치료하기위한 백신에서 이러한 코로나 바이러스의 용도에 관한 것이다.

 

발명의 배경

 

전염성 기관지염 (IB)의 병인 인 조류 전염성 기관지염 바이러스 (IBV)는 주로 호흡기뿐만 아니라 장, 신장 및 난관의 상피 세포에서도 복제되는 국내 가금류의 전염성이 높은 전염성 병원균입니다. IBV는 Order Nidovirales, Family Coronaviridae, Subfamily Corona virinae 및 Genus Gammacoronavirus의 구성원입니다 . 유 전적으로 매우 유사한 코로나 바이러스는 칠면조, 뿔닭 및 꿩에서 질병을 유발합니다.

 

IB의 임상 적 징후에는 재채기, 기관 발작, 비강 분비물 및 천명음이 포함됩니다. 육류 유형의 새는 체중 증가가 감소한 반면, 알을 낳는 새는 알을 적게 낳고 품질이 떨어지는 알을 생산합니다. 호흡기 감염은 병아리에게 치명적일 수있는 2 차 세균 감염을 일으키기 쉽습니다. 이 바이러스는 또한 특히 병아리의 수란관에 영구적 인 손상을 일으켜 계란 생산과 품질을 감소시킬 수 있습니다. 신장, 때로는 치명적일 수있는 신장 질환으로 이어집니다.

 

IBV는 다른 어떤 전염병보다 가금류 산업에 더 많은 경제적 손실을 초래하는 것으로보고되었습니다. 약독 화 생백신과 불 활성화 백신이 보편적으로 IBV 제어에 사용되지만, 백신의 사용으로 얻은 보호는 백신 고장 또는 사용 된 백신과 관련이없는 새로운 IBV 혈청 형의 도입으로 인해 손실 될 수 있습니다. 가금류 산업에 대한 위험.

 

또한, 백신 프로그램의 효율성과 비용 효율성을 향상시키기 위해 ovo에서 사용하기에 적합한 백신을 개발할 필요가 있습니다. 난소 백신 접종과 관련된 주요 문제는 바이러스가 배아에 병원성을 갖지 않고 바이러스에 대한 모계 유래 항체의 존재 하에서 복제 할 수 있어야한다는 것입니다. 현재의 IBV 백신은 발육란에서 여러 번의 계대를 통해 유도되며, 이로 인해 닭의 병원성이 감소 된 바이러스가 생성되어 약독 화 생백신으로 사용될 수 있습니다. 그러나 이러한 바이러스는 거의 항상 배아에 대해 증가 된 독성을 나타내므로 부화율을 감소시키기 때문에 난소 예방 접종에 사용할 수 없습니다. 경우에 따라 부화율이 70 % 감소합니다.

 

발육란에서 여러 번 통과 한 후 감쇠는 다른 단점도 있습니다. 바이러스의 감쇠는 무작위이며 바이러스가 통과 할 때마다 다르기 때문에 경험적 방법입니다. 따라서 감쇠 목적을 위해 다른 일련의 계란을 통해 동일한 바이러스가 통과하면 감쇠로 이어지는 다른 돌연변이 세트가 발생합니다. 프로세스와 관련된 효능 문제도 있습니다. 일부 돌연변이는 바이러스 복제에 영향을 미치고 일부 돌연변이는 바이러스를 너무 약화시킬 수 있습니다. 면역 원성에 영향을 미칠 수있는 S 유전자에서도 돌연변이가 발생할 수 있으므로 원하는 면역 반응이 영향을 받고 잠재적 인 백신이 필요한 혈청 형에 대해 보호하지 못할 수 있습니다. 또한 백신의 독성 및 안정성으로의 복귀와 관련된 문제가 있습니다.

 

IBV 통제를 위해 새롭고 더 안전한 백신을 개발하는 것이 중요합니다. 따라서 이러한 문제와 관련이없는 IBV 백신, 특히 난자 백신에 사용될 수있는 백신이 필요합니다.

 

발명의 측면 요약

 

본 발명자들은 IBV를 합리적으로 감쇠시키기 위해 역 유전학 접근법을 사용했다. 이 접근법은 각 돌연변이의 위치가 알려져 있고 바이러스에 미치는 영향, 즉 감쇠의 이유를 도출 할 수 있기 때문에 발육란에서 여러 번의 계대 후 무작위 감쇠보다 훨씬 더 제어 할 수 있습니다.

 

그들의 역 유전학 접근법을 사용하여, 본 발명자들은 바이러스가 감소 된 수준의 병원성을 갖도록하는 다양한 돌연변이를 확인 하였다. 병원성 수준은 바이러스가 발육란에 투여 될 때 배아에 병원성이되지 않고 복제 할 수 있도록 감소 될 수있다. 

이러한 바이러스는 난자 백신 접종에 적합 할 수 있으며, 이는 상당한 이점이며 발아 란에서 여러 번 계대 후 생성 된 약독 화 된 IBV 백신보다 개선됩니다.

 

따라서, 첫 번째 측면에서,

본 발명은 하나 이상의 비 구조 단백질 (nsp) -10, nsp-14, nsp-15에 돌연변이를 포함하는 다 단백질을 코딩하는 변이 복제 유전자를 포함하는 약독 화 된 생 코로나 바이러스를 제공한다. 또는 nsp-16.

 

변이 복제 유전자는 다음 목록에서 선택된 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함하는 단백질을 암호화 할 수 있습니다 :

• • 서열 번호 6의 85 번 위치에서 Pro에서 Leu로,
  • SEQ ID NO : 7의 위치 393에서 Val에서 Leu로;
  • 서열 번호 8의 위치 183에서 Leu에서 Ile로;
  • SEQ ID NO : 9의 위치 209에서 Val에서 Ile까지.

레플리카 제 유전자는 서열 번호 6의 85 번 위치에서 Pro에서 Leu 로의 아미노산 돌연변이를 포함하는 단백질을 코딩 할 수있다.

레플리카 제 유전자는 SEQ ID NO : 7의 393 번 위치에서 Val에서 Leu 로의 아미노산 돌연변이; 서열 번호 8의 위치 183에서 Leu에서 Ile로; 서열 번호 9의 209 위치에서 Val에서 Ile로.

 

레플리카 제 유전자는 서열 번호 6의 85 번 위치에서 Pro에서 Leu 로의 아미노산 돌연변이를 포함하는 단백질을 코딩 할 수 있고; SEQ ID NO : 7의 위치 393에서 Val에서 Leu로; 서열 번호 8의 위치 183에서 Leu에서 Ile로; 서열 번호 9의 209 위치에서 Val에서 Ile로.

 

레플리카 제 유전자는 다음 목록에서 선택된 하나 이상의 뉴클레오티드(DNA) 치환을 포함 할 수 있습니다 :

 

                뉴클레오타이드(DNA)에서 12137 위치의  C 내지 T;

                뉴클레오티드 위치 18114에서 G가 C로,

                19047 위치의 뉴클레오타이드에서 T가 A로, 

                뉴클레오티드 위치 20139에서 G가 A로;

                서열 번호 1로 나타낸 서열과 비교.

                코로나 바이러스는 전염성 기관지염 바이러스 (IBV) 일 수 있습니다.

                코로나 바이러스는 IBV M41 일 수 있습니다.

 

코로나 바이러스는 적어도 일부가 M41 이외의 IBV 혈청 형으로부터 유래 된 S 단백질을 포함 할 수있다.

예를 들어, S1 서브 유닛 또는 전체 S 단백질은 M41 이외의 IBV 혈청 형에서 유래 할 수 있습니다.

본 발명의 제 1 양태에 따른 코로나 바이러스는 상응하는 야생형 복제 체를 발현하는 코로나 바이러스에 비해 병원성이 감소되어, 바이러스가 발육란에 투여 될 때, 배아에 병원성이되지 않고 복제가 가능하다.

두 번째 측면에서, 본 발명은 본 발명의 첫 번째 측면과 관련하여 정의 된 바와 같은 변이 복제 유전자를 제공한다.

세 번째 측면에서, 본 발명은 본 발명의 두 번째 측면에 따른 변이 코로나 바이러스 복제 유전자에 의해 코딩 된 단백질을 제공한다.

네 번째 측면에서, 본 발명은 본 발명의 두 번째 측면에 따른 레플리카 제 유전자를 포함하는 플라스미드를 제공한다.

제 5 측면에서, 본 발명은 다음 단계를 포함하는 본 발명의 제 1 측면에 따른 코로나 바이러스의 제조 방법을 제공한다 :

• • (i) 본 발명의 네 번째 측면에 따른 플라스미드를 숙주 세포로 형질 감염시키는 단계;
  • (ii) 복제 유전자로 코로나 바이러스 균주의 게놈을 포함하는 재조합 바이러스로 숙주 세포를 감염시키는 단계;
  • (iii) 플라스미드의 레플리카 제 유전자 서열과 재조합 바이러스 게놈의 상응하는 서열 사이에 상 동성 재조합이 일어나 변형 된 레플리카 제 유전자를 생성하는 단계; 과
  • (iv) 변형 된 레플리카 제 유전자를 포함하는 재조합 바이러스를 선별하는 단계.

            재조합 바이러스는 우두 바이러스 일 수 있습니다.

            이 방법은 또한 다음 단계를 포함 할 수 있습니다.

• • (v) 단계 (iv)로부터의 재조합 바이러스로부터 DNA로부터 변형 된 레플리카 제 유전자를 포함하는 재조합 코로나 바이러스를 회수하는 단계.

제 6 측면에서, 본 발명은 본 발명의 제 1 측면에 따른 코로나 바이러스를 생산할 수있는 세포를 제공한다.

제 7 측면에서, 본 발명은 본 발명의 제 1 측면에 따른 코로나 바이러스 및 제약 상 허용되는 담체를 포함하는 백신을 제공한다.

여덟 번째 측면에서, 본 발명은 본 발명의 일곱 번째 측면에 따른 백신을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 대상체에서 질병을 치료 및 / 또는 예방하는 방법을 제공한다.

 

본 발명의 추가 측면은 다음을 제공한다 :

• • 대상체에서 질병을 치료 및 / 또는 예방하는데 사용하기위한 본 발명의 일곱 번째 측면에 따른 백신.
  • 대상체에서 질병을 치료 및 / 또는 예방하기위한 백신의 제조에있어서 본 발명의 제 1 측면에 따른 코로나 바이러스의 용도.

질병은 전염성 기관지염 (IB) 일 수 있습니다.

 

백신의 투여 방법은 다음으로 구성된 군에서 선택 될 수있다. 점안액 투여, 비강 내 투여, 식수 투여, 부화 후 주입 및 난내 주입.

예방 접종은 난소 예방 접종으로 할 수 있습니다.

 

본 발명은 또한 본 발명의 제 6 측면에 따른 세포를 본 발명의 제 1 측면에 따른 코로나 바이러스로 감염시키는 단계를 포함하는, 본 발명의 제 7 측면에 따른 백신을 생산하는 방법을 제공한다

 

참고 : 고로나 바이러스 정보 1  :  코나바이러스 발명관련

          https://blog.daum.net/brokenblock/7298577